Practicas de VDRL-USR y rosa de Bengala

VDRL– USR

Agente de Diagnóstico

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en suero sin inactivar, plasma y LCR (no requiere reconsti-tución)

·         INTRODUCCIÓN  

La sífilis es una enfermedad generalizada, producida por el  Treponema pallidum y transmitida habitualmente por contacto sexual.

El diagnóstico descansa en la serología; los métodos determinan dos clases de anticuerpos:

   1 )  Tipo “cardiolipina”, no treponema e inespecíficos.

 2) los antitreponemas específicos. La facilidad para su determinación ha hecho que  los del tipo cardiolipina se utilicen universalmente en  las exploraciones  iniciales ya sean exámenes individuales o encuestas de población; la variante técnica más  comúnmente empleada es la llamada V D R L   ( Ve n e r e a l   D i s e a s e   R e s e a r c h   L a b o r a t o r y )   q u e determina la floculación en placa (cuantitativa) del antígeno con cardiolipina y lecitina

·         OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

1. Obtener 3.0 mL de sangre por punción venosa.

2. Centrifugar y separar el suero.

·         MÉTODO CUALITATIVO

En un anillo de una placa cóncava añada 0.05 mL de suero problema

1. En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otro por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie del anillo.

2.  Añadir una gota del antígeno en cada una de las muestras.

3. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm

DURANTE 4 MINUTOS. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede  provocar la evaporación de las muestras, por tanto, la placa en rotación puede ser cubierta con una tapa de caja petri humedecida previamente con una gasa.

4. Leer inmediatamente al microscopio con Objetivo y Ocular 10 X

Interpretación

Control Positivo: Presencia de  floculación mediana agrande.

Control  Negativo:  Ausencia de floculación.

Nota:

1. Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.

2.  Sueros débiles positivos y con fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa,  ya que ocasionalmente puede presentarse el fenómeno de prozona.

3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 minutos, puede secarse la reacción y dificultar la interpretación.

4. El antígeno en suspensión debe de estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

Rosa de Bengala

Antígeno Brucelar Amortiguado para el  Diagnóstico de Brucelosis

Prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas específicas de  Brucella  (Brucella melitensis, abortus y suis).

 

·         PRINCIPIO

Se utiliza un antígeno de  Brucella abortus  biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y  teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05  para la detección de aglutininas específicas de Brucella. Esta prueba puede  ser utilizada para un diagnóstico temprano. 

·         REACTIVOS

•  Antígeno Rosa de Bengala 

•  Control Positivo de Brucella 

•  Control Negativo de Brucella 

MATERIAL PROPORCIONADO

•  Placa de prueba. (Se recomienda que siempre

se utilice una placa de vidrio para una mejor

observación de los resultados).

•  Pipetas desechables.

•  El gotero incluido proporciona una gota de 30-40

µL.

•  Pipeta automática

RECOLECCION DE MUESTRA Y PREPARACIÓN

Se recomienda que únicamente se utilice suero. Evite la hemólisis o lipemia de las muestras ya que esto puede interferir con los resultados. Conservar la muestra de 2-8°C (275-288 °K) si no se va a realizar el estudio en el momento.

·         PROCEDIMIENTO

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 µL de  la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala  hasta que se encuentre totalmente homogéneo,  después coloque 30 µL en la placa de prueba, en  el mismo circulo donde se coloco la muestra del  paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar  un aplicador diferente para cada muestra).

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4  minutos.

5.  Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el  resultado. Importante:  Después de este tiempo  la lectura ya no es válida.

RESULTADOS

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4  minutos tomados a partir de que se comenzó a  mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se  da un espacio para la observación de ciertas  aglutininas que se revelan lentamente y que de otra  manera se pueden omitir, además de que se pueden  presentar reacciones no específicas.

* No Aglutinación - Suero Negativo

* Cualquier cantidad de Aglutinación - Presencia de  anticuerpos específicos. Suero Positivo

Esta es sólo una prueba cualitativa de screening, la  cual si resulta positiva debe ser confirmada mediante  otra prueba cuantitativa para brucelosis como:

Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en  Presencia de 2-Mercaptoetanol.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante  hemocultivos es de suma importancia.